流感的檢測原理是什麼?
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現在病原微生物的檢測方法豐富多彩。我們常規檢測的病原,可以針對病原本身去檢測,如使用顯微鏡,直接檢測病原(如細菌、真菌等),但是在臨床工作中應用侷限,不適用病毒檢測。還有一類是培養法,常規的細菌、真菌都可以採用培養技術,但是對於病毒而言,由於培養對實驗室條件要求較高,而且也無法滿足快速診斷的的要求,所以目前培養法在病毒診斷方面的應用較少,多用於科研實驗室。
還有其他方法,比如抗原檢測(針對病原微生物)和抗體(針對人體對病原微生物的免疫反應)檢測。此外,最重要的,也是今天著重強調的分子生物學檢測方法。對於現在的感染性疾病而言,如果醫院想讓病原微生物診斷水平提高,儘可能滿足臨床需求,分子生物學檢測將會成為一個必不可少的手段。
檢測樣本採集有哪些注意事項?
流感病毒和一些非典型病原體(比如肺炎衣原體或者鸚鵡熱衣原體等),以及病毒不能獨立存活繁殖,多存在於粘膜上皮細胞內。因此我們要注意,流感病毒感染,取樣的時候就不能輕描淡寫的在相應部位輕輕的沾一下,建議稍微用力採集到呼吸道上皮細胞。脫落的上皮細胞可見於所有呼吸道分泌物。強調使用分子生物學方法檢測,最主要的一點就是分子生物學檢測的靈敏度高,即使原始樣本中病原量少也可以檢測出來。另外,應注意,有些病原在健康人群是很少存在定植的情況,一般認為健康人群少見甲流、乙流病毒定植,所以在就診人群中一旦檢測出來,同時患者有相關症狀的話,即可確診。其他的呼吸道病毒,比如鼻病毒或呼吸道合胞病毒,在健康人群是有少量定植的,特別是兒童,這時要根據半定量結果,再結合患者本身的症狀和免疫狀況綜合判斷。
臨床症狀的嚴重程度和病毒量有關,這也解釋了為什麼說最好不要僅報告一個陰性或陽性的結果,建議分子生物學檢測時,報告一個半定量的結果或者在未來隨著技術的推進,能夠報告一個定量的結果(如採用數字PCR技術),報告樣本里含有病毒的量。對於微生物實驗室或分子生物學實驗室的工作人員來說,由於採集呼吸道樣本的時候難於準確定量,可報告給臨床一個CT值,即在熒光定量PCR中,擴增曲線開始增高的迴圈數,CT值越小,說明原始樣本的病毒量越高。病毒量與病情相關,最初2-3天達到高峰。當然,有些分子生物學方法,如恆溫擴增、擴增產物電泳法檢測,是無法提供定量或半定量結果的。
流感病毒實驗室檢測,樣本型別可包括鼻腔分泌物、鼻腔沖洗液、鼻咽拭子、咽拭子、咽沖洗液。
一般而言,咽部採集樣本病毒量略低。分子生物學比較靈敏,因此應用的樣本種類比較廣泛。而抗原檢測的靈敏度不高,所以有時如果不是在病毒量高峰時取樣或者不是採集的鼻咽部拭子,而只是咽拭子,尤其是醫生、護士或者其他相關醫療人員沒有嚴格按照操作在咽部轉動3~5周,略微用力的話,都可能導致陽性率下降,患者可能是感染患者,但是沒有檢測出來。
下呼吸道樣本,包括痰液、氣管吸出物、Balf,都可以檢出病毒。如果懷疑肺炎,從口咽部到下呼吸道取樣也可以反映出來。一旦檢出,強烈指向患者存在相關部位感染。
因為甲流、乙流以及呼吸道合胞病毒與腺病毒、鉅細胞病毒、EB病毒不同,為RNA病毒,容易被環境中RNA酶降解,建議保存於特定樣本儲存液中送檢,其中含有抑制RNA酶的成分,能夠減少RNA降解,提高檢出的陽性率。
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